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01-08-2005

L'approche scientifique de Probiox - J. Pincemail Laboratoire Probiox - Liège

 
Au sein de Probiox, une spin-off de l'université de Liège, il nous est apparu intéressant de mettre notre connaissance scientifique au service du monde médical en élaborant des bilans de stress oxydant qui devraient permettre de répondre notamment à certaines questions comme :
- le patient présente-t-il des déficits en antioxydants ou en oligo-éléments ?
- si oui, quelle sera la meilleure stratégie pour corriger le statut de stress oxydant ?
- quels seront les effets réels de cette correction sur la concentration plasmatique des antioxydants et des dommages oxydatifs au niveau des divers substrats biologiques ?
- le patient présente-t-il des facteurs de risques cardio-vasculaires autres que le cholestérol et liés à la formation excessive de dérivés toxiques de l'oxygène ?
- quelles sont les origines possibles de la présence d'un stress oxydant ?
- etc.
Un traitement soigné des échantillons

Le traitement des échantillons sanguins est très important. La plupart des dosages proposés pour évaluer un stress oxydant sont très sensibles aux conditions de préservation des échantillons. Ainsi, si vous gardez votre échantillon à +4 °C, vous perdez près de 50 % de votre vitamine C. Or il existe des rapports de concentration bien précis entre la vitamine C, la vitamine E, la vitamine A, etc. Imaginez un instant un échantillon sanguin dans lequel il n'y a plus de vitamine C. Cela aura bien sûr des répercussions sur les taux plasmatiques des autres antioxydants. D'où la nécessité de traiter les échantillons selon des règles bien spécifiques incluant notamment que les échantillons de sang soient immédiatement centrifugés, puis de congeler le plasma à -20 °C.

Quels paramètres choisir ?

Actuellement, plus de 80 marqueurs sont potentiellement proposés dont seulement une bonne trentaine est réalisable dans les conditions usuelles de la routine clinique. Chaque technique a ses propres limites et ses propres sensibilités. Le stress oxydant est un phénomène beaucoup trop complexe pour être mis en évidence par une seule méthode aussi simple ou aussi compliquée soit-elle.

On propose souvent la capacité antioxydante totale qui n'est qu'un reflet très pâle de ce qui peut se passer au niveau de la concentration plasmatique en antioxydants. Ce test consiste à évaluer la capacité que possède le sang complet ou le plasma à inhiber la production d'espèces oxygénées réactives générées par un système in vitro. C'est une méthode de screening qui est l'addition des activités individuelles de chaque antioxydant présent dans ces milieux biologiques. Depuis peu, des méthodes très rapides permettant un dosage en quelques minutes utilisent la chimioluminescence. Elles permettent de différencier spécifiquement la capacité antioxydante totale du plasma due aux antioxydants lipophiles et hydrophiles. Cependant, l'interprétation des résultats doit se faire avec prudence. Le test reflète en effet souvent le taux circulant en acide urique, l'antioxydant possédant la réactivité la plus constante aux espèces oxygénées réactives.

Nécessité d'une batterie de tests

Je pense qu'il faut pratiquer un ensemble d'analyses. Nous essayons de proposer en fait un ensemble d'analyses s'appuyant à la fois sur la mesure des antioxydants, la détermination des oligo-éléments, l'analyse du statut sanguin en fer et la mise en évidence des dommages oxydatifs au niveau de différents substrats. On ne peut pas établir un bilan du stress oxydant simplement en dosant les antioxydants. Il faut, en effet également regarder les marqueurs du stress oxydant qui peuvent avoir de l'importance et jouer sur l'oxydation des lipides, particulièrement au niveau des LDL.

On s'intéresse aussi au métabolisme du fer puisque le fer est un élément important qui va augmenter la production des espèces réactives de l'oxygène.

D'autres éléments sont potentiellement des substrats qui peuvent contribuer à augmenter le stress oxydant. Je pense, entre autres, au glucose. Il s'oxyde très rapidement et va augmenter l'oxydation. Mesurer le glucose est un élément qui va permettre de mieux étudier le stress oxydant. Le profil des acides gras a son importance également. Les acides gras de type oméga-3 sont les plus importants et ce sont des molécules hautement oxydables.

Des bilans adaptés

Nous avons réalisé la nécessité de réaliser des bilans antioxydants adaptés à la situation pathologique envisagée et cela selon des critères objectifs de la littérature. L'analyse de la littérature montre que certains marqueurs, parmi les quelque 80 actuellement disponibles, sont plus pertinents que d'autres selon les situations pathologiques.

Nous avons donc développé des bilans de stress oxydants spécifiquement adaptés à diverses pathologies ou situations physiologiques dans lesquelles le stress oxydant est susceptible d'être impliqué (sport intensif, maladies cardio-vasculaires, cancer, diabète, dialyse, bien vieillir…).

En d'autres termes, selon la pathologie, on ne va pas s'intéresser aux mêmes types de marqueurs. On s'intéressera par exemple, dans le risque cardio-vasculaire, aux LDL oxydées et aux anticorps contre LDL oxydées. Ce qui n'a pas d'intérêt si vous vous intéressez à un problème de cancer.

Ces bilans établis, ils peuvent être efficaces et aussi évoluer dans le temps en fonction des données de la littérature.

Reste à interpréter ces données. Un autre problème est celui des valeurs de référence, le type de matrice et la représentation graphique des résultats.

Les laboratoires proposent généralement leurs propres valeurs basées sur des patients. Je pense qu'il faut avoir une autre approche et établir des valeurs normales sur des populations saines et faire des vérifications très régulières de ces valeurs normales de référence. Il faut aussi comparer ces données avec la littérature et surtout les comparer en fonction des matrices utilisées. Par exemple, un taux plasmatique de sélénium n'a rien à voir avec un taux dans le sérum. Si vous essayez d'interpréter un taux plasmatique de sélénium par rapport à des études faites sur du sérum, cela n'a pas du tout la même signification.

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